成人支气管哮喘患者25-羟维生素D3、外周血
T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白IgE的相关性分析

陈 慧1 陈光辉1 黄培坚1 邱智枫1 林 涛2

1.南方医科大学附属小榄医院 广东 中山 528415
2.中山市陈星海医院检验科 广东 中山 528415

【摘 要】目的：通过对成人哮喘患者25-羟维生素D3、外周血T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白IgE的相关性的研究，为哮喘的病因探索和临床治疗提供依据。方法：选取2018年10月～2019年1月在南方医科大学附属小榄医院呼吸内科住院治疗的支气管哮喘患者30例作为患者组，另选取同期体检的健康成人30例作为对照组，补充检测方法与统计学方法（如：采用流式细胞术检测外周血 T淋巴细胞亚群，电化学发光法检测血清25-(OH)D3和血清总IgE，统计分析与疾病的相关性）。结果：患者组CD3+、CD4+明显低于对照组，CD4+/CD8 +、IgE水平明显高于对照组，差异均有统计学意义( P＜0.05)。两组间25-(OH)D3水平比较，差异没有统计学意义（P＞0.05）。25-(OH)D3水平与CD3+(%)、CD8+(%)间呈明显正相关，差异有统计学意义(P＞0.05)，与IgE水平、CD4 +/CD8+间呈明显负相关，差异有统计学意义(P＞0.05)。IgE水平与CD4+/CD8+间呈明显正相关，差异有统计学意义( P＞0.05)，与CD3 +(%)、CD4+(%)、CD8+(%)间呈明显负相关，差异有统计学意义(P＞0.05)。结论：支气管哮喘患者CD3+、CD4 +明显降低，CD4+/CD8+和IgE水平明显升高，对哮喘的病因探索和临床治疗具有指导作用。

【关键词】支气管哮喘；25-(OH)D3；外周血T淋巴细胞；IgE

支气管哮喘（简称哮喘）是由多种细胞包括嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等及细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病[1]。哮喘的发病机制还不完全清楚，同时受遗传因素和环境因素的影响，与慢性气道炎症、气道高反应性（AHR）、变态反应、神经调节失常等因素及其相互作用有关[2]。目前研究表明，维生素D在体内的活性形式1,25-(OH)2D3与维生素D受体（VDR）结合后，可对免疫系统发挥多种调节作用 [3]。25-(OH)D3是维生素D在血液循环中的主要形式，常被作为衡量体内维生素D水平的指标。哮喘的发生包括多种机制，T淋巴细胞亚群失衡被认为是哮喘的主要免疫发病机制。同时，Th1/Th2反应失衡，B淋巴细胞数量增多，IgE水平升高也与哮喘的急性发作密切相关。本研究通过对我院成人哮喘患者25-羟维生素D3、外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白IgE间的相关性的研究，为哮喘的病因探索和临床治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年10月～2019年1月在南方医科大学附属小榄医院呼吸内科住院治疗的支气管哮喘患者30例作为患者组，其中男12例，女18例，年龄34~77岁，平均年龄（58.56±13.00）岁。入选病例均符合2016年修订的《支气管哮喘防治指南》（中华医学会呼吸病学分会哮喘学组）中的诊断标准[1]。排除标准①年龄<18岁或>80岁；②合并严重心脑血管疾病、免疫系统疾病、血液系统疾病、肿瘤及其它影响维生素D水平和IgE水平的疾病；③近1个月内使用过糖皮质激素；④近6个月进行过维生素D补充治疗。另选取同期在南方医科大学附属小榄医院体检的健康成人30例作为对照组，其中男12例，女18例，年龄31~78岁，平均年龄（57.83±13.18）岁。两组在性别、年龄、体质指数（BMI）等方面无差异（ P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有纳入对象均晚餐后禁食，第二天清晨空腹抽取静脉血5ml，其中2ml置于乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）管内，用于外周血T淋巴细胞亚群检测，采样后应尽快检测，如不能及时检测，标本放置4-8℃可保存24小时；另3ml置于促凝管内，用于血清25-(OH)D3和血清总IgE检测，采样后待标本凝固，以4000r/min离心5min，留取血清待检，如不能及时检测，将血清放置-80℃保存待检。

1.2.2 血清25-(OH)D3和血清总IgE检测 采用电化学发光法检测血清25-(OH)D3和血清总IgE，检测仪器为罗氏Cobase 601全自动电化学发光免疫分析仪，检测试剂、质控品、校准品均为罗氏配套进口试剂，严格按产品说明进行操作。

1.2.3 外周血T淋巴细胞亚群检测采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群，包括CD3+、CD4+、CD8+，并计算CD4+/CD8 +，检测仪器为BD FACS Calibur流式细胞仪，检测试剂为BD原装进口淋巴细胞亚群试剂，严格按产品说明进行操作。

1.3 统计学分析

数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析，所有计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。采用Pearson进行相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组间各项指标比较 对两组间各项指标进行统计学分析，患者组外周血T淋巴细胞亚群CD3+(%)、CD4+(%)明显低于对照组，CD4+/CD8+和血清IgE水平明显高于对照组，差异均有统计学意义( P＜0.05)。患者组血清25-(OH)D3水平和外周血T淋巴细胞亚群CD8+(%)均低于对照组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 两组间IgE、25-(OH)D3和T淋巴细胞亚群比较（x±s）

2.2 各项指标间的相关性 Pearson相关性分析结果显示，25-(OH)D3水平与CD3+(%)、CD8+(%)间呈明显正相关，差异有统计学意义(P＞0.05)，与IgE水平、CD4+/CD8+间呈明显负相关，差异有统计学意义(P＞0.05)。IgE水平与CD4+/CD8+间呈明显正相关，差异有统计学意义(P＞0.05)，与CD3+(%)、CD4+(%)、CD8+(%)间呈明显负相关，差异有统计学意义( P＞0.05)。见表2。

3 讨论

有研究表明，Th1/Th2失衡，B细胞分泌产生IgE水平升高，促进机体内炎性细胞分泌白三烯，诱导嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞浸润，进而引起支气管平滑肌痉挛，导致哮喘的发生[19]。本研究发现，哮喘患者Th细胞比例增高，在其作用下，B淋巴细胞活化、增殖并分泌大量IgE，导致IgE水平增高，患者组IgE水平显著高于对照组（P＜0.05），且IgE水平与CD4 +/CD8+间呈明显正相关，差异有统计学意义(P＞0.05)，与CD3+(%)、CD4+(%)、CD8+(%)间呈明显负相关，差异有统计学意义( P＞0.05)。

综上所述，T淋巴细胞亚群的失衡是哮喘发病的重要机制，并在其作用下，B淋巴细胞活化、增殖并分泌大量IgE，而维生素D可对免疫系统发挥多种调节作用，通过检测维生素D、外周血T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白IgE水平，有利于对哮喘病因探索。今后还将进一步对哮喘患者急性发作期与缓解期维生素D、外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白IgE水平以及患者肺功能情况进行大样本研究，为哮喘的临床治疗提供依据。

参考文献：

[1] 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南（2016年版）[J].中华结核和呼吸杂志,2016,39(9):675-697.

[2] 谢华.哮喘抗原免疫治疗进展困惑及策略[J].临床军医杂志,2016,44(9):978-981.

[3] 吴奎,任立红.维生素D在哮喘发病机制中的作用[J].国际免疫学杂志,2013,36(6):437-441.

[4] 童同.免疫球蛋白和T淋巴细胞亚群与支气管哮喘的关系研究[J].中国医学前沿杂志(电子版).2017,9(8):103-106.

[5] 李飞,高金明.维生素D、维生素D受体与支气管哮喘[J].中华哮喘杂志（电子版）,2014,4(1):38-43.

[6] 员笑笑,吴世满,张红红.维生素D水平与成人支气管哮喘关系的Meta分析[J].临床荟萃,2018,33(2):167-171.

[7] 陈伟伟.维生素D与支气管哮喘研究进展[J].国际儿科学杂志,2011,38(4):364-367.

[8] 张德信,董蕾,孙秀珍, 等.成人过敏性难治性支气管哮喘患者血清维生素D水平的相关临床研究[J].中华哮喘杂志（电子版）,2013,7(4):12-15.

中山市科学技术局（课题编号：2015B1238)

表2 各项指标间的相关性分析