痰液结核杆菌2种检验方法的临床应用比较研究

练润琼 范剑伟

佛山市顺德区暨南大学附属口腔医院 广东 佛山 528300

【摘 要】目的：对比研究痰液结核杆菌2种检验方法的临床应用效果。方法：此次80例研究对象是2018年1月1日至2019年6月30日实施痰液结核杆菌检验的疑似结核病患者，检验中分别使用富氢水抗酸染色法、酸性改良罗氏培养法，对比分析两种检验结果。结果：富氢水抗酸染色法阳性检出率为16.25%，酸性改良罗氏培养法阳性检出率为12.5%，差异无统计学意义（ P＞0.05）。在检验时长方面，富氢水抗酸染色法短于酸性改良罗氏培养法，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：痰液结核杆菌检验中富氢水抗酸染色法和酸性改良罗氏培养法，能取得同等的检出效果，不过相对来说富氢水抗酸染色法检验所用时间更短，值得全方位推广应用。

【关键词】痰液检验；结核杆菌；结核病；富氢水抗酸染色法；酸性改良罗氏培养法

结核病属于顽固性、传染性、慢性疾病，是结核杆菌侵入人体诱发感染所致，最常侵入器官为肺部，所以肺结核患者居多，给人类的生命健康带来严重威胁[1]。该病如果能早确诊、早治疗、合理用药，大部分患者能够治愈，这就要求有快速、准确的诊断方法。不过常规的结核病实验室检验方法用时长、准确性差，无法满足临床需求，迫切需要研究出准确、快速的检验方法。基于此，此次研究围绕富氢水抗酸染色法和酸性改良罗氏培养法进行痰液结核杆菌检验展开，以确定最佳的检验方法，现将详情报道如下：

1 资料和方法

1.1 一般资料

筛选2018年1月1日至2019年6月30日进行结核杆菌检验的80例疑似结核病患者为研究对象，其中女性患者37例、男性患者43例，年龄最大81岁、最小24岁，年龄均值（52.13±6.92）岁。

1.2 方法

1.2.1 痰液标本采集：所有研究对象在清晨使用生理盐水漱口，取深咳第一口脓性、干酪样或黏液样性质的痰液放入无菌痰培养盒中，标本量2-3mL。

1.2.2 检验方法：①富氢水抗酸染色法：在痰液标本中加入适量无菌蒸馏水，再置入高压蒸汽锅中灭菌，温度121℃、灭菌时长30分钟，加入适量二甲苯进行振荡处理，时长10分钟，均匀混合后加入蒸馏水到瓶口，放置15分钟，在瓶口放置载玻片，静置15分钟取下，待干燥后进行抗酸染色，并放在生理显微镜下观察。②酸性改良罗氏培养法：在培养基制备时使用猪肺汤，提高葡萄糖、维生素E、小牛血清、植物血凝素等混合物的量，制成固体培养基；在培养基斜面上均匀的接种痰液标本，放到37℃环境中培养，分别在第3天和第7天进行观察，如果7天内有菌落生长，进行抗酸染色，以证实抗酸杆菌生长；之后每7天观察1次，记录菌落污染和生长的情况；培养结果呈阳性者再利用PNB固体培养法鉴定菌种。如果8周后依然没有菌落生长，则为阴性。

1.3 观察指标

记录所有患者痰液标本经富氢水抗酸染色法、酸性改良罗氏培养法检验的阳性检出率；同时，比较两种检验方法所用时长。

1.4 统计学分析

用SPSS22.0软件处理检验数据，计数资料、计量资料用率（%）和（x±s）描述，行x2和t检验，P＜0.05表示组间差异呈统计学意义。

2 结果

2.1 比较两种痰液检验方法的阳性检出率

富氢水抗酸染色法阳性检出率为16.25%，与酸性改良罗氏培养法的12.5%对比，差异不存在统计学意义（P＞0.05）。见表1

表1 比较两种痰液检验方法的阳性检出率（n，%）

2.2 比较两种痰液检验方法所用时长

富氢水抗酸染色法检验时长明显短于酸性改良罗氏培养法检验，差异存在统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 比较两种痰液检验方法所用时长（x±s，d）

3 讨论

在全球范围内有33%左右的人受到结核杆菌感染，特别是在发展中国家发生率更高，已经成为成年人最多见的传染性疾病之一。结核杆菌主要依靠消化道、破损的皮肤黏膜、呼吸道等途径传播，侵入人体后会有4-8周的潜伏期，之后逐渐出现咳嗽、乏力、低热、咯血等表现[2]。尽管该病已经得到良好控制，但是最近10年，受到人口大量流动、多重耐药结核病、艾滋病等因素的影响，再次成为备受瞩目的疾病。因为结核杆菌生长速度较慢，病情发展迟缓，如果能及早发现、及早确诊，对控制病情发展和病菌传播都有着重要意义。结核病最主要的诊断方法就是结核杆菌检测，而且属于特异性方法，不仅能及时发现传染源，还能为疾病确诊、治疗方案确定提供参考信息，另外也是评估治疗效果的重要指标。痰液结核杆菌检验有着可靠性高、操作方便等特点，在临床中广泛应用，其中富氢水抗酸染色法和酸性改良罗氏培养法都是常用的痰液检验方法。

富氢水抗酸染色法是对采集的痰液标本进行高压灭菌，置入消化液，经震荡让结核杆菌分散，再根据消化液密度高于结核杆菌密度的特点，让结核杆菌在液体表面悬浮，达到集菌效果[3]。另外，抗酸染色的原理是，因为结合杆菌细胞壁内，肽聚糖外面包裹大量脂质，所以不容易着色，通过延长颜色时间、加热等方式让其染色，而染料和结核杆菌中的分枝菌酸相结合后，不容易被酸性脱色剂脱色，也就称作抗酸染色[4]。如果痰液中结核杆菌含量较少，该方法的检验灵敏度不高，只有结核杆菌浓度超过5000～10000个菌/mL时，才能很好的经生物显微镜观察到，进而判断为阳性 [5]。

酸性改良罗氏培养法是对传统罗氏培养基进行改良，由于受到遗传特性、外界因素等影响，结核杆菌生长缓慢，而传统方法需要4-6周的培养才能会有菌落生长，为了满足临床需要，经过改良成为灵敏度高、生长速度快的培养方法[6]。另外，具有菌落生长形态观看难度低、价格低、操作方面等优点，在临床中被广泛应用[7]。酸性改良罗氏培养法，是将蒸馏水替换成猪肺肉汤，加入植物血凝素、维生素E、小牛血清等，制作成固体培养基，创造有利于结核杆菌生长的环境 [8]。一方面能为结核杆菌生长提供充足的营养，另外添加的物质能刺激结核杆菌加速生长，进而缩短培养时间[9]。最快经过1周的培养，就能明显看到典型、粗大的菜花状菌落，而且菌落较大、生长茂盛，不过一般培养时间都在25-30天[10]。不仅增加了检验人员的工作量，还会降低工作效率，如果检验人员长时间观察还容易出现视觉疲劳，在检验中出现失误，降低工作质量，发生漏诊情况。

本次研究结果显示，80例疑似患者的痰液标本经富氢水抗酸染色法检验，阳性检出率为16.25%，经酸性改良罗氏培养法检验，阳性检出率为12.5%，组间差异无统计学意义（P＞0.05）。两种检验方法所用时长对比，富氢水抗酸染色法明显短于酸性改良罗氏培养法，前者平均（3.18±1.57）天，后者平均（26.52±3.64）天，组间差异呈统计学意义（P＜0.05）。由此可见，在痰液结合杆菌检验中，富氢水抗酸染色法和酸性改良罗氏培养法阳性检出率相当，不过在相同条件下富氢水抗酸染色法能缩短检验时间，减少检验人员工作量，提高检验的灵敏度。在临床应用中，为了进一步提升诊断准确性，建议结合患者的临床症状、X线胸片等影像学检查；另外，经酸性改良罗氏培养法检验呈阳性者，需要再进行菌种分型、鉴定，以及药敏试验，以便为用药治疗提供指导意见。

总而言之，痰液结核杆菌检验中富氢水抗酸染色法和酸性改良罗氏培养法，能取得同等的检出效果，不过相对来说富氢水抗酸染色法检验所用时间更短，值得全方位推广应用。

参考文献：

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