PCR技术在乙型肝炎检验中的应用效果

杨春珍

莘县第三人民医院 山东 聊城 252427

【摘 要】目的：探讨聚合酶链式反应技术（PCR）在乙型肝炎检验中的应用效果。方法：选取2016年1月-2018年1月在我院接受治疗的146例乙型肝炎患者，按照随机数表法分为观察组（n=73）与对照组（n=73），对照组采用酶联免疫吸附法（ELISA)检验，观察组采用PCR技术检验，比较两组患者检验结果。 结果：观察组最终确诊率为97.26%，显著高于对照组的83.56%（P<0.05）。结论：PCR技术在乙型肝炎检验中确诊率高，可以为临床医护人员后续治疗提供准确参考依据。

【关键词】乙型肝炎；聚合酶链式反应技术；酶联免疫吸附法

乙型肝炎是一种传染性很强的传染病，甚至有患者由于慢性感染进展为肝硬化或肝癌，对患者生命安全与健康构成严重威胁[1]。尽早为患者提供诊断与干预措施是控制并减少感染的基本途径。本文主要探讨聚合酶链式反应技术（PCR）在乙型肝炎检验中的应用效果，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月-2018年1月在我院接受治疗的146例乙型肝炎患者，按照随机数表法分为观察组（n=73）与对照组（n=73）。对照组73例，男40例，女33例，年龄22-64岁，平均年龄（43.05±8.12）岁。观察组73例，男38例，女35例，年龄21-65岁，平均年龄（43.14±7.96）岁。两组一般资料对比均保持同质性（p＞0.05）。

纳入标准：146例患者经临床检查均与乙型肝炎诊断标准相符合；所有患者及其家属均知情并签署知情同意书。

排除标准：存在自身免疫功疾病者；合并心肝肺等严重功能障碍以及癌症患者；处于妊娠以及哺乳期患者；在参与本实验前1周接受过抗病毒治疗患者；存在认知或精神障碍无法正常沟通患者。

1.2 方法

清晨，所有患者均于空腹状态下抽取5m静脉血为检测标本，使用西班牙生产的Minicen型号离心机处理分离得到血清，并放置于零下20℃中保存备用。

对照组采用酶联免疫吸附法（ELISA)检验：使用上海酶联生物科技有限公司提供的乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原以及e抗体等核心测试剂，所有操作均严格遵照试剂盒说明书进行，使用美国伯腾BioTek Elx800酶标仪进行吸光度检测。

观察组采用PCR技术检验，使用由艾康生物技术(杭州)有限公司生产的乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒（PCR荧光探针法）进行检测，整个过程均严格遵守试剂盒操作要求，使用美国生物公司生产的ABI7300 PCR仪实施荧光定量PCR扩增以及结果分析。在检测过程中用到的仪器还包括：安信企业生产的AXTG16G台式高速离心机、海门市其林贝尓仪器制造有限公司生产的UMV-1漩涡均匀器、杭州瑞诚生产的干式恒温器等。

1.3 观察指标

两组检测方法最终确诊例数以及占比。

1.4 统计学方法

本研究146例乙型肝炎患者研究数据均采用SPSS20.0软件分析，确诊率（n，%）以x2检验。p<0.05，表明差异显著。

2 结果

两组检测结果

观察组确诊率显著高于对照组（P<0.05），详见表1：

3 讨论

乙型肝炎病毒属于临床常见病原体，主要作为乙型肝炎的病原体，能够通过人体体液以及血液传播，严重损害人体肝脏。乙型肝炎作为临床典型慢性疾病，治疗周期长，期间极易并发多种疾病，患者生存质量降低。据世界卫生组织调查[2]，全球约存在3亿人持续感染乙型肝炎病毒，每年由肝细胞癌或肝脏衰竭死亡人数多达100万。因此，乙型肝炎一直是临床关注并深入研究的重点问题。在乙型肝炎病毒检测工作中，ELISA检验是最常见检测方法，主要是科学测定乙型肝炎病毒表达后的抗原与抗体水平，进而实现乙型肝炎病毒诊断目的。但随着医学技术对于乙型肝炎诊断工作的不断深入研究，发现ELISA检验方法存在假阳性诊断结果，影响乙型肝炎诊断工作准确性，延误患者病情治疗，导致肝脏受到严重损害。PCR技术是近几年来逐渐普及起来的一种新型检测方法，临床也将其称之为体外基因扩增技术，属于分子生物学发展至今的新兴产物，受到医学界广泛重视。在临床工作中，主要将PCR技术用于测定特定DNA片段与相关研究分析中，相当于天然复制DNA过程，组成部分包括变性-复性-延伸等，当模板DNA通过加热温度达到93℃左右时，维持一段时间，之后经PCR扩增技术合成双链DNA或者模板DNA，双链DNA经过解离形成单链DNA，与引物结合。当模板DNA链温度下降至55℃时，模板DNA单链互补序列与引物配对结合，在聚合酶作用下，DNA模板-引物双链以dNTP为反应原料，以靶序列为模板，遵照半保留复制原则，形成与模板DNA链互补的半保留复制链，以上过程不断循环往复，获得大量半保留链。可直接检测DNA水平，尤其是在病原体鉴定、免疫学以及遗传学研究工作中存在重要意义。PCR技术在对乙型肝炎患者诊断中，患者血清中HBsAg水平受到乙型肝炎病毒自身转录翻译功能不断下降因素影响，也会出现明显降低，很有可能出现假阴性现象，导致误诊、漏诊等情况 [3]。PCR技术可以对患者体内存在乙型肝炎病毒DNA进行荧光标记，同时科学检测分析乙型肝炎病毒自身DNA转录翻译过程，有效避免DNA自身低水平复制中出现的病毒抗体假阴性现象，降低误诊、漏诊发生概率，进而提升乙型肝炎病毒检测准确性。本文结果表明，观察组确诊率为97.26%，对照组为83.56%，组间差异显著（P<0.05）。说明采用PCR技术检测乙型肝炎疾病，确诊率高，可以作为医护人员开展相应治疗措施的参考依据。

表1 检测结果对比

综上所述，PCR技术在乙型肝炎检验中具有良好应用效果，值得推广应用。

参考文献：

[1] 李庆鑫. PCR技术在乙型肝炎检验中的应用效果分析[J]. 中国医药指南, 2017, 15(23):132-133.

[2] 卢天龙. PCR技术应用在乙型肝炎检验中的价值探析[J]. 中国实用医药, 2017, 12(28):27-28.

[3] 朱明岩, 叶英. 不同荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒检测中的应用评价[J]. 安徽医药, 2016, 20(9):1723-1726.